%0 Master thesis %T Rôles du Proliferating Cell Nuclear Antigen et de p21/waf1, protéines régulatrices du cycle cellulaire dans l'apoptose du polynucléaire neutrophile : Intérêt potentiel dans la modulation de l'inflammation %+ École Pratique des Hautes Études (EPHE) %+ Institut Cochin (IC UM3 (UMR 8104 / U1016)) %A Mocek, Julie %8 2013-12-03 %D 2013 %K polynucléaire neutrophile %K apoptose %K inflammation %K PCNA %K p21 %Z Life Sciences [q-bio]Master thesis %X Notre laboratoire s'intéresse à la régulation de la balance survie/apoptose du polynucléaireneutrophile, phénomène important dans la résolution de l'inflammation. En effet, le polynucléaire neutrophilea un rôle essentiel dans la défense infectieuse mais il possède également un fort potentiel pro-inflammatoire, àcause des médiateurs hautement toxiques qu'il peut libérer lorsqu'il est stimulé. Le "Proliferating Cell NuclearAntigen" (PCNA) est une protéine de 36 kDa conservée au cours de l'évolution. C'est une protéineindispensable à la prolifération cellulaire de par son rôle dans la réplication et la réparation de l'ADN.L’implication de PCNA dans la régulation de l’apoptose a également été mis en évidence mais cette propriétéde PCNA est jusqu’à présent restreinte aux cellules proliférantes. De manière intéressante, la présence dePCNA dans le cytosol des polynucléaire neutrophiles, cellules en fin de différenciation et qui ne prolifèrentpas, a été observée au laboratoire. L’objectif de mon travail a porté sur l’étude des fonctions de PCNA dans labalance survie / apoptose du neutrophile ainsi que son mécanisme d’action.L'analyse in vitro des polynucléaire neutrophiles isolés de prélèvements sanguins de sujets sains apermis d’identifier une nouvelle fonction de PCNA: un rôle anti-apoptotique dans le cytosol du polynucléaireneutrophile. En effet, nous avons montré une corrélation entre la survie du polynucléaire neutrophile etl’expression accrue de PCNA dans son cytosol. Cette observation est vraie pour une apoptose constitutive oupharmacologique (induite par la gliotoxine, inhibiteur de la voie NFκB ou par l'anti-Fas, agissant par la voiedes récepteurs de mort). Nous avons ensuite analysé les mécanismes par lesquels PCNA est anti-apoptotique.Le peptide "p21 carboxy-terminal" provenant de l’inhibiteur de kinases cycline-dépendantes p21, augmentel'apoptose du polynucléaire neutrophile en entrant en compétition avec des partenaires de PCNA. Nous avonségalement identifié de nouveaux partenaires de PCNA dans le cytosol des polynucléaires neutrophiles par desapproches de co-immunoprécipitation, en particulier les pro-caspases-3, -8, -9 et -10. PCNA séquestrerait lespro-caspases et aurait ainsi un rôle dans la survie du polynucléaire neutrophile.Le rôle anti-apoptotique de PCNA a été confirmé dans des cellules myéloïdes (PLB-985) différenciéesen polynucléaire neutrophiles et stablement transfectées avec l’ADN complémentaire de PCNA. Le mutant dePCNA dans le domaine interdomain-connecting loop (ICL) a été également transfecté dans les cellules PLB-985. Après différenciation de ces cellules en polynucléaire neutrophiles, ce mutant, contrairement à la protéinesauvage, ne présentait pas l'activité anti-apoptotique. Ces résultats suggèrent que la fixation de partenairesprotéiques sur le domaine d'interaction ICL pourrait être responsable de l'activité anti-apoptotique de PCNA.Grâce à la même approche, nous avons montré l'effet pro-apoptotique de la protéine p21 dans les cellulesPLB-985 différenciées en polynucléaire neutrophiles.Mon projet a permis l'identification de nouvelles protéines dont l'expression est modulée au cours del'apoptose du polynucléaire neutrophile. Nous avons déterminé les fonctions des protéines PCNA et p21dans le cytosol des polynucléaire neutrophiles, respectivement anti-apoptotique et pro-apoptotique. Cesrésultats permettent donc une meilleure compréhension des mécanismes de l’apoptose despolynucléaires neutrophiles et donc, par voie de conséquence, potentiellement de nouvelles voies derecherche à explorer pour des traitements anti-inflammatoires. %G French %2 https://ephe.hal.science/hal-01491544/document %2 https://ephe.hal.science/hal-01491544/file/EPHE%20Julie%20Mocek%20final%20Nov2013.pdf %L hal-01491544 %U https://ephe.hal.science/hal-01491544 %~ INSERM %~ UNIV-PARIS5 %~ EPHE %~ CNRS %~ MEM-EPHE-SVT %~ PSL %~ TEST-DEV %~ UNIV-PARIS %~ UP-SANTE %~ EPHE-PSL